GB5009.124-2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中氨基酸的測(cè)定內(nèi)容是什么?百檢網(wǎng)檢測(cè)范圍廣泛，可根據(jù)客戶需求選擇合適的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)及項(xiàng)目安排檢測(cè)，全國(guó)近千家合作實(shí)驗(yàn)室，CMA/CNAS資質(zhì)齊全，可就近安排寄樣檢測(cè)。今天百檢網(wǎng)就給大家簡(jiǎn)單介紹一下GB5009.124-2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中氨基酸的測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容。

1 范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用氨基酸分析儀(茚三酮柱后衍生離子交換色譜儀)測(cè)定食品中氨基酸的方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中酸水解氨基酸的測(cè)定,包括天冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、組氨酸、賴氨酸和精氨酸共16種氨基酸

2 原理

食品中的蛋白質(zhì)經(jīng)鹽酸水解成為游離氨基酸,經(jīng)離子交換柱分離后,與茚三酮溶液產(chǎn)生顏色反應(yīng),再通過(guò)可見(jiàn)光分光光度檢測(cè)器測(cè)定氨基酸含量。

3 試劑和材料

除非另有說(shuō)明,本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T6682中規(guī)定的一級(jí)水。

3.1 試劑

3.1.1 鹽酸(HCl):濃度≥36%,優(yōu)級(jí)純

3.1.2 苯酚(C6HOH)

3.1.3 氮?dú)?純度99.9%。

3.1.4 檸檬酸鈉(Na3C6H:O;·2H2O):優(yōu)級(jí)純。

3.1.5 氫氧化鈉(NaOH):優(yōu)級(jí)純。

3.2 試劑配制

3.2.1 鹽酸溶液(6mol/L):取500mL鹽酸加水稀釋至1000mL,混勻。

3.2.2 冷凍劑:市售食鹽與冰塊按質(zhì)量1:3混合

3.2.3 氫氧化鈉溶液(500g/L):稱取50g氫氧化鈉,溶于50mL水中,冷卻至室溫后,用水稀釋至100mL,混勻。

3.2.4 檸檬酸鈉緩沖溶液[c(Naˉ)=0.2mo/L]:稱取19.6g檸檬酸鈉加入500m水溶解,加入16.5mL鹽酸,用水稀釋至1000mL,混勻,用6mol/L鹽酸溶液或500g/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至2.2

3.2.5 不同pH和離子強(qiáng)度的洗脫用緩沖溶液:參照儀器說(shuō)明書配制或購(gòu)買

3.2.6 茚三酮溶液:參照儀器說(shuō)明書配制或購(gòu)買。

3.3 標(biāo)準(zhǔn)品

3.3.1 混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液:經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

3.3.2 16種單個(gè)氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品:固體,純度≥98%。

3.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

34.1 混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1μmol/mL):分別準(zhǔn)確稱取單個(gè)氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品(*至0.000011g)于同一5omL燒杯中,用8.3mL6mol/L鹽酸溶液溶解,*轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,用水稀釋定容至刻度,混勻(各氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品稱量質(zhì)量參考值見(jiàn)表1)。

3.4.2 混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)工作液(l00nmol/mL):準(zhǔn)確吸取混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.0mL于10mL容量瓶中,加pH2.2檸檬酸鈉緩沖溶液定容至刻度,混勻,為標(biāo)準(zhǔn)上機(jī)液。

4 儀器和設(shè)備

4.1 實(shí)驗(yàn)室用組織粉碎機(jī)或研磨機(jī)。

4.2 勻漿機(jī)

4.3 分析天平:感量分別為0.0001g和0.0001g。

4.4 水解管:耐壓螺蓋玻璃試管或安瓿瓶,體積為20mL~30mL。

4.5 真空泵:排氣量≥40L/min。

4.6 酒精噴燈。

4.7 電熱鼓風(fēng)恒溫箱或水解爐。

4.8 試管濃縮儀或平行蒸發(fā)儀(附帶配套15mL~25mL試管)

4.9 氨基酸分析儀:茚三酮柱后衍生離子交換色譜儀。

5 分析步驟

5.1 試樣制備

固體或半固體試樣使用組織粉碎機(jī)或硏磨機(jī)粉碎,液體試樣用勻漿機(jī)打成勻漿密封冷凍保存,分析用時(shí)將其解凍后使用

5.2 試樣稱量

均勻性好的樣品,如奶粉等,準(zhǔn)確稱取一定量試樣(*至0.0001g),使試樣中蛋白質(zhì)含量在10mg~20mg范圍內(nèi)。對(duì)于蛋白質(zhì)含量未知的樣品,可先測(cè)定樣品中蛋白質(zhì)含量。將稱量好的樣品置于水解管中很難獲得高均勻性的試樣,如鮮肉等,為減少誤差可適當(dāng)增大稱樣量,測(cè)定前再做稀釋。

對(duì)于蛋白質(zhì)含量低的樣品,如蔬菜、水果、飲料和淀粉類食品等,固體或半固體試樣稱樣量不大于2g,液體試樣稱樣量不大于5g。

5.3 試樣水解

根據(jù)試樣的蛋白質(zhì)含量,在水解管內(nèi)加10mL~15mL6mol/L鹽酸溶液。對(duì)于含水量高、蛋白質(zhì)含量低的試樣,如飲料、水果、蔬菜等,可先加入約相同體積的鹽酸混勻后,再用6mol/L鹽酸溶液補(bǔ)充至大約10mL。繼續(xù)向水解管內(nèi)加入苯酚3滴~4滴。

將水解管放入冷凍劑中,冷凍3min~5min,接到真空泵的抽氣管上,抽真空(接近0Pa),然后充入氮?dú)?重復(fù)抽真空-充入氮?dú)?次后,在充氮?dú)鉅顟B(tài)下封口或擰緊螺絲蓋。

將已封口的水解管放在110℃±1℃的電熱鼓風(fēng)恒溫箱或水解爐內(nèi),水解22h后,取出,冷卻至室溫。

打開(kāi)水解管,將水解液過(guò)濾至50mL容量瓶?jī)?nèi),用少量水多次沖洗水解管,水洗液移入同一50mL容量瓶?jī)?nèi),*后用水定容至刻度,振蕩混勻。

準(zhǔn)確吸取1.0mL濾液移人到15mL或25mL試管內(nèi),用試管濃縮儀或平行蒸發(fā)儀在40℃~50℃加熱環(huán)境下減壓干燥,干燥后殘留物用1mL~2mL水溶解,再減壓干燥,*后蒸干用1.0mL~2.0mL pH2.2檸檬酸鈉緩沖溶液加入到干燥后試管內(nèi)溶解,振蕩混勻后,吸取溶液通過(guò)0.22m濾膜后,轉(zhuǎn)移至儀器進(jìn)樣瓶,為樣品測(cè)定液,供儀器測(cè)定用。

5.4 測(cè)定

5.4.1 儀器條件

使用混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)工作液注入氨基酸自動(dòng)分析儀,參照J(rèn)G1064-2011氨基酸分析儀檢定規(guī)程及儀器說(shuō)明書,適當(dāng)調(diào)整儀器操作程序及參數(shù)和洗脫用緩沖溶液試劑配比,確認(rèn)儀器操作條件

5.4.2 色譜參考條件

a) 色譜柱:磺酸型陽(yáng)離子樹(shù)脂;

b) 檢測(cè)波長(zhǎng):570nm和440nm。

5.4.3 試樣的測(cè)定

混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣品測(cè)定液分別以相同體積注入氨基酸分析儀,以外標(biāo)法通過(guò)峰面積計(jì)算樣品測(cè)定液中氨基酸的濃度。

6分析結(jié)果的表述

6.1 混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液中各氨基酸濃度的計(jì)算各氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品稱量質(zhì)量參考值見(jiàn)表1。

…………

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